野生云南肉豆蔻种子形态变异与脂肪酸组成分析 -种子科技杂志社投稿

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野生云南肉豆蔻种子形态变异与脂肪酸组成分析

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肉豆蔻科(Myristicaceae)肉豆蔻属(Myristica)约150种，野生分布于东南亚及太平洋岛屿，我国热区是肉豆蔻属分布的北部边缘。该属的肉豆蔻()是著名的香料和药材，在热带地区广泛栽培，种子含油率40%～73%，油中十四烷酸相对含量为80%～90%[1-5]。云南肉豆蔻( H. Li)是云南野生种，分布于西双版纳州和红河州沟谷雨林地段，而西双版纳的种群数量较大，主要集中在海拔800 m以下沟谷或凹地，种子含油率不足10%[2-3]。据文献资料记录，云南肉豆蔻与肉豆蔻的种子含油率差异过大，云南肉豆蔻种子含肉豆蔻酸达66.79%，种群数量极少，面临灭绝的危险[6]。种子形态变异和脂肪酸的变异在一定程度上反映了群体的遗传变异，分析云南肉豆蔻的脂肪酸组成和表型变异对其遗传多样性保护和资源利用都有重要意义。本文从云南省景洪市基诺乡的天然林中采集野生云南肉豆蔻种子进行种子形态、含油率、脂肪酸组成变异分析。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 种子来源与处理

2017年7月在云南肉豆蔻种子成熟的季节，从云南省景洪市基诺乡天然林内(100°90′～101°14′E，21°50′～21°58′N，海拔500～800 m)以株间距大于50 m的要求随机选择单株，从树下拾取自然脱落而尚新鲜的种子，分单株编号记录，编号为1～22号。种子带回实验室，人工除去假种皮后，以鼓风烘干箱36℃恒温干燥至恒重，常温通风保存。

1.1.2 仪器与设备

B-815脂肪酸提取仪，瑞士步琪有限公司；HP6890GC/5973MS气相色谱-质谱联用仪、6890N气相色谱仪，美国Agilent Technologies公司。

1.2 试验方法

1.2.1 种子形态指标测定

以烘干种子为材料，对每株树的种子随机抓取20粒，用游标卡尺测量种长和种宽，测量精度为0.01 mm；用电子天平测单粒重，测重精度为0.001 g；不足20粒者全部测定；不足15粒者不记入统计数据。测量数据计算变幅、均值、变异系数和种子长宽比。

1.2.2 油脂提取

油脂提取于2017年7月在云南省热带作物科学研究所农产品加工实验室完成。选取种皮完好无破损的种子，机械脱壳后剔除不饱满、变色等劣质种仁，机械破碎，研钵研细，以石油醚(AR级，30～60℃沸程)为溶剂，用B-815脂肪酸提取仪进行油脂提取，挥干溶剂后获取的油脂分别用2 mL离心管封装，冷藏保存，直接送样分析。

1.2.3 油脂脂肪酸组成与相对含量测定

油脂脂肪酸组成与相对含量测定于2017年8月委托中国科学院昆明植物研究所测试中心完成。取约50 mg油脂，加入20 mL 1%的硫酸甲醇溶液，水浴回流至油珠消失(约5 h)。将反应产物冷却至室温后加入3倍体积的蒸馏水，用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液用水洗至中性，经无水硫酸钠干燥后蒸去部分乙醚，即得到该油的脂肪酸甲酯乙醚溶液。反应产物直接进样作GC及GC-MS分析。

GC-MS分析条件：GC条件，DB-225MS石英毛细管柱(30 mm×0.25 mm×0.25 μm)；升温程序为起始温度180℃，保持25 min，5℃/min升温至220℃，保持20 min；柱流量1.0 mL/min；进样口温度230℃；柱前压100 kPa；进样量1.0 μL；分流比30∶1；载气为高纯氦气。MS条件，电离方式EI；电子能量70 eV；传输线温度250℃；离子源温度230℃；四极杆温度150℃；质量范围35～500 u。采用标准谱库检索定性。

GC条件：DB-WAX石英毛细管柱(30 mm×0.32 mm×0.53 μm)；升温程序为起始温度200℃，保持26 min，5℃/min升温至220℃，保持20 min；柱流量1.5 mL/min；进样口温度250℃；FID温度250℃；进样量1.0 μL；分流比50∶1；载气为高纯氮气。采用气相色谱峰面积归一化法计算各成分的相对含量。

1.2.4 数据处理

采用Excel 2007进行数据分析。

2 结果与分析

2.1 云南肉豆蔻种子形态群体变异

对19株树的种子测定数据计算单株内的种长、种宽、单粒重、长宽比的变幅、均值、变异系数，再以单株的均值代表单株指标进行群体变异分析，结果见表1。从表1可以看出，种长群体变幅为34.73～45.89 mm，种宽为20.36～26.54 mm，单粒重为7.67～16.86 g，长宽比为1.63～2.11，相应的变异系数分别为7.13%、5.95%、20.94%和7.27%。平均种长最大值(45.89 mm)是最小值(34.73 mm)的1.32倍，变异系数仅为7.13%，种长这一性状的群体变异并不大；种宽的统计数据与此相近。种子长宽比是表现种子总体形态的重要指标，单株长宽比最大值(2.11)是最小值(1.63)的1.29倍，变异系数为7.27%，说明种子的总体形态群体变异并不大。单粒重是群体变异最大的性状，单株的最大值(16.86 g)是最小值(7.67 g)的2.20倍，变异系数为20.94%，群体变异较大。以372粒种子重与种长和种宽进行相关性分析，相关系数为0.727 1和0.620 8，达到极显著水平(P

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