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青刺果种子和油粕中的营养成分对比及酚类物质(2)
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摘要:1.5.3 脂肪酸成分分析 样品中的脂肪酸用GC-MS-QP2010仪器(岛津,日本)进行分析。采用索氏提取法对种子和油粕进行提取,首先将提取物进行甲基化,即加入
1.5.3 脂肪酸成分分析
样品中的脂肪酸用GC-MS-QP2010仪器(岛津,日本)进行分析。采用索氏提取法对种子和油粕进行提取,首先将提取物进行甲基化,即加入300 μL己烷,700 μL 1 mol/L酸化甲醇,85 ℃的条件下水浴,待样品温度降至室温后,于-20 ℃下放置20 min后取出,再向混合液中加入375 μL 0.9% 的KCl和100 μL的正己烷。
取0.6 μL样液,使用OV-1柱(30 m×0.25 mm id)进行气相色谱分析,进样温度设为280 ℃。温度梯度为130~180 ℃,升温速度为10 ℃/min,180 ℃保持20 min;180~220 ℃,升温速度为5 ℃/min, 220 ℃保持2 min;220~250 ℃,升温速度为30 ℃/min,250 ℃保持5 min。用QP2010质谱仪进行质谱检测,氦气作为载气,进样速率为1.2 mL/min。电子碰撞电压为70 eV,检测器电压设为900 V,发射源温度200 ℃和扫描范围为m/z35~800。
1.5.4 矿物质元素分析
用AOAC中的标准[13]对样品进行矿物质元素分析,将提取物用去离子水稀释为15 mL,用火焰原子吸收光谱法进行检测(Analytikjena,novAA 400P)。
1.6酚类物质的定性定量分析
用高分辨液质联用仪(Thermo Fisher Ultimate 3000 UHPLC system)检测青刺果种子和油粕的酚类物质组成。采用Reprospher 100 C18柱(1.8 mm×100 mm, 2 μm, Dr. Maisch, Germany),以0.1%甲酸水为流动相A,乙腈为流动相B,流动相的浓度梯度为:0~5 min, 10% B; 5~15 min, 10%~15% B; 15~25 min, 15%~35% B; 25~30 min, 35%~50% B;30~32 min, 50%~100% B。进样量为3 μL,流速为0.2 mL/min,柱温设为30 ℃。
ESI-HRMS/MS检测时使用模式为阴离子模式,扫描范围150m/z~2 000m/z。种子和油粕中酚类化合物的二级谱图信息是由Q-Exactive Orbitrap mass spectrometer (Thermo Fisher Scientific, Germany)检测器检测得到。其余质谱参数设置如下:分辨率为70 000;鞘气流速为32 L/min;辅助气体流速为8 L/min;喷射源电压为3.3 kV;S-lens射频水平为50%;辅助气体加热器温度为350 ℃;毛细管温度为320 ℃。
根据液质分析鉴定出的种子和油粕中的酚类化合物,准确称取相应或结构相似的酚类物质标准品,分别配成5个浓度梯度,然后用相同的液相液质条件进行分析,得到标品各浓度的峰面积。以标品的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制出标准曲线。然后,根据种子和油粕中各酚类物质的峰面积,进行定量分析。
1.7DPPH自由基清除能力测定
种子和油粕对DPPH自由基的清除能力的实验参考DUDONNE等的方法[14]进行测定。用甲醇溶解提取物的干粉,并按照提取率计算,将样品浓度分别稀释为400、600、800、1 000、1 200 μg干重/mL,各取0.5 mL,分别加入2 mL 0.1 mmol/L DPPH的甲醇溶液;对照组加入0.5 mL甲醇和2 mL DPPH。混合均匀,室温放置30 min,于517 nm波长下测定吸光度。样品组和对照组均设立空白对照。
1.8ABTS自由基清除能力测定
参照已有文献[15]对样品清除ABTS自由基的能力进行测定。ABTS工作液配置如下:取 7 mmol/L ABTS 5 mL加入88 μL 40 mmol/L的过硫化钾溶液,室温放置12~16 h,混合后用乙醇稀释,于734 nm处测定吸光值,工作液的吸光值应为0.。样品前处理同DPPH相同,0.5 mL样品,加入ABTS工作液4 mL:对照组为0.5 mL甲醇和ABTS工作液4 mL,混匀。于734 nm处用酶标仪测定吸光值。样品组和对照组均设立空白对照。
1.9数据分析
所有数据以平均值±标准误差表示,每组实验进行3次平行。采用Turkey单因素方差分析(P<0.05)。所有数据均用Origin 8.5(OriginLab, MA, USA)进行数据处理。
2 结果与分析
2.1青刺果种子和油粕中总酚总黄酮含量
青刺果种子和油粕酚类物质的提取率如表1所示,油粕的提取率略高于种子,但没有显著性差异(P>0.05)。根据提取物得率,青刺果种子和油粕的总酚和总黄酮含量以原料干重表示并进行比较分析,结果如表1所示。
表1青刺果种子和油粕中总酚总黄酮含量(n=3)Table1TotalphenolicandflavonoidscontentsinseedsandpomaceofPrinsepiautilisRoyle(n=3)酚类物质提取率/%总酚/[mg·(100 g)-1干重]总黄酮/[mg·(100 g)-1干重]种子12.油粕14.
从表1可知,种子中的总酚含量显著高于油粕(P<0.05),这可能是由于榨油过程中种子中的一些酚类物质发生了氧化分解,或是一些极性较低的酚类物质在榨油后溶于油中所致。有研究发现,橄榄在经过榨油加工后,其油粕的总酚含量比橄榄中下降了约73%[16]。植物果实或种子往往富含酚类物质,对高生灌木的浆果CoriandrumsativumL.种子的研究发现其总酚含量为410 mg/100g干重[17],这与青刺果种子中总酚的含量相当。但是,SURVESWARAN等[18]研究了133个植物样本的总酚含量,如大蒜种子(150 mg/100 g干重)、鹰叶刺种子(130 mg/100 g干重) 和黄瓜种子中(70 mg/100 g干重),这些植物中的总酚含量均低于青刺果种子和油粕。种子中的总黄酮含量也显著高于油粕(P
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